摘要:论文筛选产低温纤维素酶菌株，并进行鉴定和初步发酵条件的分析。采集农田土壤和农产品果实表皮，通过培养和刚果红平板法筛选分离产纤维素酶菌株。利用16SrDNA 通用引物对菌株基因组DNA 进行扩增，分析16S rDNA序列的同源性，对菌株进行鉴定。采用DNS 法测定所产纤维素酶酶活。结果显示，分离得到一株产低温纤维素降解细菌T34，初步鉴定其芽胞杆菌Bacillus。该菌在20℃培养48h时酶活达到最大值，为1.43U/mL•mim。

关键词：细菌；纤维素酶；低温；筛选

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摘要

Abstract

1绪论-2

1.1 纤维素酶-2

1.1.1 纤维素酶组成及来源-2

1.1.2 纤维素酶的作用机理-2

1.1.3 纤维素酶的应用-3

1.2 本研究的意义-5

2 实验材料和方法-6

2.1 试验材料-6

2.1.1 菌株的来源-6

2.1.2 主要化学试剂及药品-6

2.1.3 主要仪器设备-6

2.1.4 培养基的配置-7

2.1.5 高压灭菌-7

2.2 菌株筛选方法-8

2.2.1 菌株初步筛选-8

2.2.2 产纤维素酶菌株的筛选-8

2.2.3 菌株保藏-9

2.3 菌种的鉴定-9

2.3.1 生长曲线的制作-9

2.3.2 菌株基因组DNA的提取-9

2.3.3 16SrDNA序列分析-10

2.4纤维素酶特性-10

2.4.1 羧甲基纤维素钠 (CMC-Na) 法-10

2.4.2 葡萄糖标准曲线的绘制-11

2.4.3 发酵时间对纤维素酶的发酵影响测定-11

2.4.4 温度对纤维素酶的发酵影响测定-12

2.4.5 金属离子对纤维素酶活的影响测定-12

3 实验结果和结论-13

3.1 筛选到产低温纤维素酶菌株-13

3.2 菌株T34生长状况分析-13

3.3 基因组DNA提取结果-14

3.4 16SrDNA扩增结果-14

3.5 16SrDNA测序分析-14

3.6 T34产纤维素酶分析-15

3.6.1 葡萄糖标准曲线的绘制-15

3.6.2 发酵时间分析-15

3.6.3 发酵温度分析-16

3.6.4 金属离子对纤维素酶活的影响测定-16

结论-17

致谢-18

参考文献-19