摘要:[目的]首先优化纤维素酶提取鸡骨草总黄酮的最佳工艺参数，然后对其进行分离纯化，最后研究其抗氧化性。[方法]首先研究影响纤维素酶提取鸡骨草总黄酮的几个因素，包括酶浓度、液料比、pH值、酶解温度和酶解时间，并通过Box-Behnken试验设计与分析优化出了最佳工艺参数；然后采用AB-8型大孔吸附树脂对纤维素酶提取的总黄酮进行分离纯化；最后分别采用DPPH自由基法和羟基自由基法研究鸡骨草总黄酮的抗氧化性。 [结果]纤维素酶提取鸡骨草总黄酮的最佳工艺参数为液料比14.5mL/g，酶解温度49.9℃和酶解时间85min，在此条件下，实际得率为0.711%，与理论值0.708%基本一致；AB-8型大孔吸附树脂分离纯化鸡骨草总黄酮的最佳工艺参数为上样液流速1.0mL/min、上样液浓度1.6mg/mL、上样液pH值5.0、洗脱液浓度60%乙醇、洗脱液流速0.5mL/min和洗脱剂用量为70mL，此条件下鸡骨草纯化产品中总黄酮的纯度由12.20%提高到了35.21%，提高了1.89倍；上述条件下所得的鸡骨草总黄酮对DPPH自由基和羟基自由基具有良好的清除能力。[结论]采用纤维素酶提取鸡骨草总黄酮和AB-8型大孔吸附树脂分离纯化鸡骨草总黄酮都是可行的；鸡骨草总黄酮具有一定的抗氧化性。

关键词  鸡骨草；总黄酮；纤维素酶提取；分离纯化

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 鸡骨草概述-1

1.2 总黄酮的提取方法-1

1.2.1 热水提取-1

1.2.2 有机溶剂提取-1

1.2.3 超声波提取-1

1.2.4 微波提取-2

1.2.5 酶法提取-2

1.3 总黄酮的分离纯化方法-3

1.3.1 柱层析法-3

1.3.2 纸层析法-3

1.3.3 超临界CO2萃取法-3

1.3.4 HPLC法-3

1.3.5 大孔树脂吸附法-3

1.4 总黄酮的抗氧化性-4

1.5 本课题的研究意义及主要内容-4

2 材料与方法-5

2.1 材料-5

2.1.1 原料-5

2.1.2 试剂-5

2.1.3 仪器-6

2.2 方法-6

2.2.1 酶法提取-6

2.2.2 AB-8型大孔吸附树脂分离纯化-8

2.2.3 抗氧化性的测定-9

3 结果与分析-11

3.1 纤维素酶提取鸡骨草总黄酮-11

3.1.1 单因素试验-11

3.1.2 Box-Behnken试验-13

3.2 AB-8型大孔吸附树脂分离纯化鸡骨草总黄酮-15

3.2.1 静态吸附洗脱试验-15

3.2.2 动态吸附洗脱试验-16

3.2.3 纯度的测定试验-19

3.3 鸡骨草总黄酮的抗氧化性试验-19

3.3.1 对DPPH自由基的清除作用-19

3.3.2 对羟基自由基的清除作用-19

结论-21

致谢-22

参考文献-23