摘要:本研究采用多酶分步复合水解方式制备黑豆抗氧化活性肽，并用大孔吸附树脂和Sephadex G-15对其进行了分离纯化。

利用Alcalase蛋白酶，Neutrase蛋白酶，Flavourzyme蛋白酶依次水解黑豆蛋白30 min、60 min、30 min，获得的黑豆蛋白酶解产物对DPPH自由基的清除率为50.44%。

采用DA201-C大孔吸附树脂进行吸附，并用不同浓度的乙醇进行梯度洗脱，试验结果表明：25%乙醇洗脱组分肽得率最高，为35.67%；100%乙醇洗脱得到的黑豆肽组分对DPPH自由基的清除率最高，为64.52%，其平均疏水值为5.36 KJ/mol。

采用凝胶过滤层析对100%乙醇洗脱得到的肽组分进行分离纯化，试验结果表明：用蒸馏水洗脱效果较好，得到P1、P2和P3三个组分，其中P1和P2为肽类物质，P3为氨基酸，组分P2具有最强的抗氧化活性，其对DPPH自由基的清除率为69.37%，平均疏水值为5.96 KJ/mol。

关键词 黑豆肽；分离纯化；抗氧化活性

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 黑豆概述-1

1.2大豆蛋白酶解产物的国内外研究概况-1

1.3大豆肽抗氧化的研究进展-2

1.3.1人体内自由基过高的危害-2

1.3.2抗氧化剂的研究进展-2

1.3.3抗氧化活性肽的作用-2

1.4大豆肽分离纯化技术研究进展-2

1.4.1微滤-3

1.4.2超滤-3

1.4.3离子交换色谱[18]-3

1.4.4大孔吸附树脂[20，21]-3

1.4.5凝胶层析法[22，23]-4

1.5研究的目的及意义-4

2 材料与方法-5

2.1 实验材料与仪器-5

2.1.1实验材料-5

2.1.2 主要实验仪器-5

2.2 实验方法-6

2.2.1黑豆蛋白的制备-6

2.2.2蛋白质含量的测定-6

2.2.3黑豆蛋白的酶解工艺-7

2.2.4黑豆蛋白酶解物水解度的测定-7

2.2.5黑豆蛋白酶解物抗氧化活性的测定(DPPH法—清除DPPH·自由基)-8

2.2.6 DA201-C大孔吸附树脂分离黑豆肽-8

2.2.7黑豆蛋白酶解物的凝胶层析分离-9

3结果与分析-10

3.1黑豆蛋白质含量测定结果-10

3.1.1蛋白质含量标准曲线的制作-10

3.1.2 黑豆蛋白质含量计算-10

3.2 黑豆蛋白水解产物的水解度和抗氧化活性的结果-10

3.3 DA201-C大孔吸附树脂分离黑豆肽及洗脱各组分肽得率和抗氧化活性-10

3.4凝胶层析对黑豆肽的分离效果-11

3.4.1不同洗脱液对黑豆抗氧化活性肽的分离效果-11

3.4.2 G-15层析分离不同组分抗氧化活性比较-13

3.5 黑豆抗氧化肽组分的氨基酸组成分析-14

结 论-16

致谢-17

参考文献-18