摘要： 

本研究建立在前期成功构建了酸浆属药食两用植物（苦蘵作为代表）的基因研究技术平台上，利用植物病毒介导的特异基因的过表达和基因沉默技术，来揭示本次研究的苦蘵的药效成分的合成代谢途径。本研究将利用两种植物病毒，通过马铃薯X病毒属的潜病毒狗尾草花叶病毒（FoMV）来实现候选基因的过表达；通过烟草脆裂病毒（TRV）实现候选基因的基因沉默（VIGS），从而成功对苦蘵内酯类化合物的生源合成代谢途径实现干扰，获得具有表达差异化的样品，为鉴定其药效成分关键基因提供了坚实的研究基础。

关键词： 苦蘵； 烟草脆裂病毒； 病毒诱导的基因沉默； 八氢番茄红素脱氢酶

目   录

 

 

引言 4

材料与方法 7

1. 实验材料 7

1.1受体植物 7

1.2大肠杆菌与质粒 7

2. 分子生物学试剂 7

1. 方法 7

1.1引物的设计 7

1.2受体植物的种植 7

1.3苦蘵药效合成途径相关基因片段的扩增和获得 8

1.4PCR产物的酶切以及载体片段连接 12

1.5苦蘵的培养及浸润接种 16

1.6样品的分子生物学分析及定量检测 16

实验结果与分析 18

2. 结果与分析 18

2.1 苦蘵Physagulin R基因合成途径相关基因的预测分析与引物设计 18

2.2 苦蘵3β HSD基因片段的VIGS载体构建 20

2.3苦蘵浸润接种的症状记录及靶基因表达量变化的定量检测 21

全文小结 24

参考文献 25

致谢 27