摘要:纤维素酶对于高效降解利用自然界中广泛存在的纤维素资源具有非常重要的作用。本文使用聚合酶链式反应（PCR）扩增获得了纤维素降解菌株P5的16S rDNA基因。通过测序得到1407 bp序列，提交至美国国立生物信息中心NCBI的GenBank数据库中，获得登录号为FJ796221。运用BLAST程序将P5 16S rDNA序列和GenBank中相关序列进行比对分析并构建系统发育树，确定了P5是Pantoea　ananatis。文章同时拟对P5菌内纤维素酶基因进行克隆，但由于P5中纤维素酶基因与相近物种中对应基因的同源性较差，未能成功克隆获得P5纤维素酶基因。本文为在分子水平上研究纤维素降解菌株和构建纤维素酶高产工程菌提供了资料。

关键词：纤维素酶；基因分析；16S rDNA；Pantoea　ananatis

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 纤维素研究概况-1

  1.1.1 纤维素的分子结构和应用前景-1

1.1.2 纤维素资源在利用中的局限性-1

1.2 纤维素酶研究概况-2

1.2.1 纤维素酶结构特点-2

1.2.2 纤维素酶的分类-2

1.2.3 纤维素酶的降解机制-2

1.2.4 纤维素酶的应用-3

1.3 纤维素酶的相关研究方法-5

1.3.1 结构生物学研究方法-5

1.3.2 酶促反映动力学研究方法-5

1.3.3 分子生物学研究方法-5

1.4 纤维素酶研究进展-6

1.4.1 纤维素酶高产菌株研究进展-6

1.4.2 纤维素酶产酶条件优化研究进展-7

1.4.3 纤维素酶基因克隆研究进展-8

1.5 课题研究背景和意义-9

2 材料与方法-10

2.1 实验材料-10

2.1.1 实验菌株-10

2.1.2 实验药品-10

2.1.3 主要仪器设备-11

2.1.4 主要试剂和培养基-11

2.2 实验方法-11

2.2.1 培养基和实验用具的高温灭菌-11

2.2.2 菌种的活化和培养-12

2.2.3 菌株基因组DNA提取-12

2.2.4 菌株16S rDNA序列分子鉴定-13

2.2.5 菌株纤维素酶基因扩增分析-14

3 结果与讨论-16

3.1 P5菌株16S rDNA电泳结果-16

3.2 P5菌株16S rDNA序列-17

3.3 16S rDNA多序列比对结果-17

3.4 同源树与系统发育树-17

3.4.1 菌株P5同源树-18

3.4.2 菌株P5系统发育树-19

3.4.2 同源树与系统发育树的分析-19

3.5 纤维素酶基因克隆结果-20

3.6 讨论-20

结论-21

致谢-22

参考文献-23