摘 要:核酸适配体（Aptamer）是一段DNA（脱氧核糖核酸）或者RNA（核糖核酸）序列,是利用体外筛选技术—指数富集的配体系统进化技术（Systematic evolution of ligands by exponential enrichment,SELEX）从核酸分子文库中得到的寡核苷酸片段.首先合成微囊藻毒素-YR的特异性巯基化适配体,将巯基化的适配体连接到沉积纳米金的玻碳电极上.然后将合成的氨基化的联吡啶钌纳米硅球修饰亲和素后连接生物素化巯基适配体的互补链,并通过互补链间的配对组装成电化学发光传感器.微囊藻毒素-YR与联吡啶钌硅球上连接的适配体互补链发生竞争反应,通过和微囊藻毒素-YR适配体结合使连接联吡啶钌硅球的适配体互补链脱落,导致电极表面发光强度的变化.利用微流控芯片化学发光检测器测定电极表面的光强度变化,探索光强度变化与体系中微囊藻毒素-YR浓度之间的关系,以完成对自来水中微囊藻毒素-YR的含量检测.微囊藻毒素-YR浓度在50 ng/L到1500 ng/L与电化学发光强度变化值呈现良好的线性关系,线性回归方程为y = 0.4252x + 29.390,相关系数R2 = 0.9961,检测限为45 ng/L,加标回收率在96.78 %-106.25 %之间.该电化学发光传感器具有成本低,灵敏度高,操作简便等优点,有望实现对微囊藻毒素-YR的污染水平的实时监测.

关键词：食品检验；联吡啶钌；微囊藻毒素-YR；电化学发光

目录

摘要

ABSTRACT

第1章 绪论-1

1.1 微囊藻毒素的性质与危害-1

1.2 当今发展的水平和发展趋势-1

1.3 立题意义与背景-1

1.4 研究内容-2

第2章 实验材料与方法-3

2.1 主要实验原料与试剂-3

2.2 主要设备与仪器-3

2.3 实验方法-3

2.3.1  反相微乳法制备联吡啶钌纳米硅球-3

2.3.2  联吡啶钌包硅材料表面连接亲和素及亲和素加入量的优化-4

2.3.3  亲和素修饰的联吡啶钌纳米硅球连接生物素化的微囊藻毒素-YR适配体互补链及反应条件优化-4

2.3.4  玻碳电极上沉积纳米金-5

2.3.5  沉积纳米金的玻碳电极表面固定巯基化微囊藻毒素-YR适配体反应时间优化-5

2.3.6  联吡啶钌电化学发光反应体系的优化-6

2.3.7  沉积纳米金的玻碳电极上检测探针的组装与优化-6

2.3.8  电化学发光传感器与微囊藻毒素-YR反应浓度优化-7

2.3.9  自来水中微囊藻毒素-YR的加标回收测定-7

第3章 实验结果与讨论-9

3.1 联吡啶钌纳米硅球的表征-9

3.2 戊二醛法连接联吡啶钌硅球和亲和素及亲和素加入量优化-9

3.3 亲和素化联吡啶钌硅球与生物素化微囊藻毒素-YR适配体互补链反应条件优化-10

3.4 玻碳电极沉积纳米金表征-11

3.5 玻碳电极上固定巯基化微囊藻毒素-YR适配体反应时间优化-11

3.6 联吡啶钌电化学发光检测反应体系优化-12

3.7 玻碳电极上检测探针的组装条件优化-14

3.8 微囊藻毒素-YR孵育浓度优化-15

3.9 自来水中微囊藻毒素-YR的加标回收测定-16

第4章 结论与展望-19

4.1 结论-19

4.2 不足之处及未来展望-19

参考文献-21

致  谢-23