摘要:本论文通过从土壤中分离菌落，土壤稀释法获得单菌落，再通过鉴别培养基，根据透明水解圈大小，判断产酶情况，获得产酶较高菌株NP28和SP1。通过PCR方法获得序列，送到上海生工生物公司测序，将序列进行拼接，获得全序列，对菌株进行初步分类。将菌株的16S rDNA序列提交到美国国立生物信息中心（NCBI），菌株登录号分别是NP28（FJ527481）和SP1（FJ908094）。分析其16S rDNA序列的同源性，对菌株进行鉴定，确定NP28是Klebsiella sp.，SP1是 Enterobacteriaceae sp.。

关键词: 酸性蛋白酶；细菌；16S rDNA；Klebsiella；Enterobacteriaceae

目录

摘要

Abstract

1  绪论-1

 1.1 酸性蛋白酶的研究和应用-1

  1.1.1酸性蛋白酶的理化性质及分离方法-1

  1.1.2 酸性蛋白酶的酶学性质-1

  1.1.3 酸性蛋白酶的作用机理-2

  1.1.4 酸性蛋白酶的应用-2

 1.2 酸性蛋白酶的应用前景-4

2 实验材料和方法-5

 2.1 实验材料-5

2.1.1 菌株-5

2.1.2 药品-5

2.1.3主要仪器设备-6

 2.2 实验方法-6

2.2.1 培养基的配制-6

2.2.1.1 LB固体培养基配制-6

2.2.1.2 配制方法注意事项-7

2.2.2 高压灭菌及操作台的消毒-7

2.2.2.1 仪器介绍-7

2.2.2.2 灭菌步骤-7

2.2.3.1 菌株的保藏-8

2.2.3.2 菌种的活化-8

2.2.4 透明圈法筛选-9

2.2.4.1 透明圈的原理-9

2.2.4.2 实验注意要点-9

2.2.4.3 实验具体操作步骤-9

2.2.5 进行PCR扩增16SrDNA-9

2.2.6 利用16S rDNA序列进行鉴定-10

3 结果与讨论-12

 3.1 实验结果-12

3.1.1 筛选到耐酸性产蛋白酶活性较高菌株-12

3.1.2 16S rDNA序列的测定和分类分析-13

 3.2 讨论-14

3.2.1 基因组DNA的提取-14

3.2.2 产酶菌株的分析-14

结论-16

致谢-17

参考文献-18