目录

摘要.........................................................................................................................................................3

引言.........................................................................................................................................................4

一实验材料.............................................................................................................................................6

二实验方法.............................................................................................................................................6 2.1茶褐素的提取...................................................................................................................................6

2.2脑胶质瘤细胞系的培养...................................................................................................................6

2.3半抑制浓度检测...............................................................................................................................6

2.4细胞完整性检测...............................................................................................................................7

2.5相关信号通路蛋白变化检测...........................................................................................................7

2.5.1收集蛋白样品................................................................................................................................7

2.5.2电泳................................................................................................................................................7

2.5.3转膜................................................................................................................................................7

2.5.4封闭................................................................................................................................................7

2.5.5一抗孵育........................................................................................................................................7

2.5.6二抗孵育........................................................................................................................................7

2.6相关基因表达量检测.......................................................................................................................8

三实验结果.............................................................................................................................................9

3.1茶褐素对人脑胶质瘤细胞系半抑制浓度的确定...........................................................................9

3.2茶褐素影响人脑胶质瘤细胞的细胞完整性..................................................................................10

3.3茶褐素影响人脑胶质瘤细胞凋亡的信号通路相关蛋白表达......................................................12

3.4茶褐素影响人脑胶质瘤细胞相关基因的表达..............................................................................12

四讨论................................................................................................................................................... 13

五结论................................................................................................................................................... 14

参考文献 ..............................................................................................................................................14

致谢....................................................................................................................................................... 16

 

 

摘要

目前治疗胶质瘤的方法主要有手术、放疗和化疗，然而这些治疗方法往往给病人带来较大痛苦和经济负担。近来有研究发现，茶叶提取物茶褐素（TB）能够抑制肺癌细胞系和肝癌细胞系的增殖并促进这些癌细胞的增殖，且有意思的是TB对这两种癌细胞的作用分子机制不同。为研究TB是否也能其作用于人脑胶质瘤细胞系，我们拟先在人脑胶质瘤细胞中进行相关研究。由于人胶质细胞瘤病大多以星型胶质细胞瘤为主，本研究选取了人的星型胶质细胞瘤细胞系U87，U251和A172用于研究。A172来源于人恶性胶质瘤，它表达较高水平的神经胶质酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP），能诱导一氧化氮合酶二型酶，这两类蛋白都是星型胶质细胞特异性蛋白。相似的，U87来源于人的3型恶性胶质瘤，是一类高侵染性的恶性胶质瘤，常常被用于癌症研究。本研究将体外培养人脑胶质瘤细胞系，并进行TB处理，采用细胞活力检测、免疫荧光染色等分子生物学手段研究TB对人脑胶质瘤细胞的作用。并采用荧光实时定量PCR（qRT-PCR）和Western blot 检测细胞增殖和凋亡相关信号通路。结果发现：TB能够对人脑胶质瘤细胞系起抑制作用，其机制是调控Akt和Erk信号通路，促进促凋亡基因Bax及Bcl-2的表达来促进人脑胶质瘤细胞凋亡。