摘    要

PTF13是本实验室前期通过蛋白质组学分析找到的，与大豆盐胁迫响应相关的转录因子，它是WRKY转录因子家族中的一员，目前尚未见相关功能报道。本研究旨在构建pDL28-35S pro-PTF13-RFP植物表达载体为PTF13在大豆中的亚细胞定位研究奠定基础和构建pDL28-35S pro-PTF13-DHA-UbqDsRed植物表达载体为PTF13的染色质免疫共沉淀实验奠定基础。我们首先以本实验室种植的中黄57号大豆为材料提取大豆根部的总RNA，然后以总RNA反转录得到的cDNA为模板克隆出与大豆耐盐相关的大豆WRKY类转录因子的PTF13基因。随后，构建了pDL28-35S pro-PTF13-RFP植物表达载体。同时，构建了pDL28-35S pro-PTF13-DHA-UbqDsRed植物表达载体。这两种植物表达载体的构建为转录因子PTF13在大豆耐盐响应中的相关功能分析奠定了基础。

目    录

引言 1

1材料与方法 2

1.1提取大豆根部总RNA 2

1.2大豆根部总RNA反转录成cDNA 3

1.2.1材料与仪器 3

1.2.2实验步骤 3

1.3 PCR扩增PTF13 4

1.3.1 实验材料与用具 4

1.3.2 实验步骤 4

1.4琼脂糖凝胶分离目的基因 5

1.4.1实验材料与用具 5

1.4.2实验步骤 5

1.5 cDNA凝胶回收 5

1.5.1实验材料与用具 5

1.5.2实验步骤 5

1.6 PTF13序列测定 6

1.7 PTF13-T vector载体连接 6

1.7.1实验材料与用具 6

1.7.2实验步骤 6

1.8 PTF13-T vector载体转化大肠杆菌、菌液PCR验证 7

1.8.1实验材料与用具 7

1.8.2实验步骤 7

1.9 质粒DNA提取 7

1.9.1质粒提取实验的材料和用具 8

1.9.2质粒提取实验的步骤 8

1.10 PTF13与pDL28-35S pro- RFP、pDL28-35S pro -DHA-UbqDsRed连接 8

1.10.1实验材料与用具 8

1.10.2实验步骤 9

1.11 pDL28-35Spro-PTF13-RFP和pDL28-35S pro-PTF13-DHA-UbqDsRed植物表达载体转化大肠杆菌并酶切验证 9

1.11.1酶切验证实验所需材料及用具 9

1.11.2实验过程 10

1.12将大肠杆菌中的T4载体转入发根农杆菌k599中 10

1.12.1实验材料与用具 10

1.12.2实验步骤 10

1.13农杆菌侵染法获得转基因大豆根 11

1.13.1实验材料与用具 11

1.13.2实验步骤 11

2 结果与分析 11

3 讨论 14

4 展望 15