摘    要

白纹伊蚊（Aedes albopictus）属于幼虫期的整个阶段都生活在水中的双翅目昆虫，对重金属具有富集作用。热激蛋白70作为热激蛋白家族中最重要、最保守的一族，能在细胞应激后，作出很明显的反应，重金属也可以诱导其合成，因此具有监测环境的作用。本研究设置不同浓度（0mg/L、0.005mg/L、0.01mg/L、0.1mg/L）的重金属镉处理白纹伊蚊幼虫，提取幼虫RNA，反转录为cDNA，再运用荧光定量PCR研究不同浓度重金属镉胁迫对白纹伊蚊幼虫hsp70 基因表达的影响。研究结果表明，热激蛋白基因hsp70 的表达水平与处理浓度及处理龄期密切相关，低龄时表达水平随处理浓度增加而增强，四龄时虽高于对照组，但却随浓度增加而降低。0.005mg/L浓度处理会显著增加hsp70的相对表达量，而0.01mg/L和0.1mg/L浓度处理会降低hsp70的相对表达量，但差异不显著。本研究证明热激蛋白70具有环境早期预警作用，为其可以作为监测环境中重金属污染的标志物提供理论依据。

目    录

1 引言........................................................................4

2 材料与仪器.................................................................5

2.1实验仪器和设备...........................................................5

2.2 实验试剂和溶液...........................................................6

2.2.1实验操作所需试剂......................................................6

2.2.2实验操作所需溶液......................................................6

3 实验方法............................................................... ....6

3.1白纹伊蚊饲养 6

3.1.1供试虫源 6

3.1.2人工气候室环境条件 6

3.1.3幼虫饲养方法 7

3.1.4成虫饲养方法 7

3.1.5白纹伊蚊卵的收集 7

3.2白纹伊蚊幼虫的Cd2+处理 7

3.2.1Cd2+浓度的确定 7

3.2.2对各龄幼虫进行Cd2+胁迫处理及取样 7

  3.3 Cd2+ 胁迫对白纹伊蚊幼虫hsp70表达的影响 8

  3.3.1引物的设计与合成 8

  3.3.2RNA的提取 8

  3.3.3RNA的检测 8

3.3.4cDNA的合成 9

3.3.5荧光定量PCR 9

4 分析不同浓度Cd2+ 胁迫对白纹伊蚊幼虫hsp70表达的影响.........................10

4.1数据分析 10

4.2实验结果 10

4.2.1RNA检测 10

4.2.2白纹伊蚊幼虫hsp70基因熔解曲线分析 11

4.2.3重金属镉对白纹伊蚊幼虫hsp70表达的影响 12

5 讨论......................................................................13

参考文献.....................................................................14

致谢..................... ...................................................16