摘要:文冠果（Xanthoceras sorbifolium Bunge）是唯一适宜在我国北方荒漠和干旱半干旱地区重点发展的木本油料树种。植物油是人类的三大营养物质之一。现在越来越多的研究开始利用分子标记来辅助选择高油高产的木本油料优良品种。据研究报道，反式-Δ2-烯酰-ACP还原酶（EAR）是植物种子脂肪酸合成途径中催化脂肪酸碳链延伸反应的重要酶；二脂酰甘油酰基转移酶（DGAT1）是植物种子内质网上催化合成三酰甘油的关键酶。本研究根据文冠果转录组数据统计分析EAR和DGAT1基因序列的SNP位点信息，并以EAR和DGAT1基因序列设计SNP引物。以文冠果不同品系的叶片为材料，提取基因组DNA，采用 PCR扩增和Sanger测序方法获得EAR和DGAT1基因含有SNP位点的序列片段，通过与转录组中EAR和DGAT1基因序列比对来验证SNP位点。结果显示：与PCR扩增获得的DGAT1基因序列相比，转录组中DGAT1序列在第264个碱基位点处发生突变，即腺嘌呤（A）突变成鸟嘌呤（G）；同时，与PCR扩增获得的EAR基因序列相比，转录组中EAR序列在第1089个碱基位点处发生突变，即胞嘧啶（C）突变成鸟嘌呤（G）。这些位点可能是与文冠果含油量相关的SNP。该结果将对文冠果种质资源评价鉴定及遗传育种工作具有重要指导意义。

关键词：文冠果；含油量；DGAT1；SNP

目录

摘要

Abstract

1 引言-1

1.1 文冠果的简介-1

1.2 文冠果种仁油的研究-1

1.3 分子标记技术的研究现状-1

1.3.1 分子标记的简介-1

1.3.2 分子标记技术的特点-2

1.4 SNP标记研究现状-2

1.4.1 SNP标记的特点-2

1.4.2 SNP标记的应用-2

1.4.3 SNP标记的研究现状与发展前景-3

1.5 植物油脂的生物合成-3

1.6植物二酰甘油基转移酶（DGAT）的研究-4

1.6.1 DGAT的分类及结构特点-4

1.6.2 DGAT的功能-4

1.7 本研究的目的和意义-4

2 材料与方法-6

2.1 实验材料与仪器-6

2.1.1 实验材料-6

2.1.2 实验试剂-6

2.1.3 实验仪器设备-6

2.2实验方法-7

2.2.1 文冠果转录组数据的SNPs筛查-7

2.2.2 文冠果种仁基因组DNA的提取-7

2.3 候选基因的确定及SNP引物设计-8

2.4 SNP引物的筛选-8

2.5 DGAT1基因SNP位点初步验证-9

2.5.1 PCR扩增产物的回收纯化-9

2.5.2 回收的PCR片段连接pMD18-T载体-9

2.5.3 大肠杆菌DH5a菌株感受态细胞的制备-10

2.5.4 连接产物转化大肠杆菌DH5a感受态细胞-10

3 结果与分析-12

3.1 文冠果转录组数据中SNPs类型统计-12

3.2 文冠果DNA的提取结果-12

3.3 DGAT1、EAR基因的SNP位点信息及SNP引物-13

3.4 DGAT1基因的SNP位点初步验证-15

结    论-17

参 考 文 献-18

致    谢-22