摘要:在这个农业发展较快的中国，农药生产也在不断的进步。在日常生活过程中，农药正在被大量使用，尤其是在那些以林业和牧业为主的地区，农药的使用更加频繁。因此，农药所产生的危害也越来越普遍，在人类生活的各个方面都有农药的残留，严重地影响到了环境的纯净度。在所有农药中，有机磷农药的危害比其他农药要大得多。目前，我们面临的问题就是如何降解有机磷农药，减少有机磷对环境、对生物造成的破坏。本文研究的是构建一种可以有效降解有机磷农药的新型工程菌，将opd基因从黄杆菌里提取出来，通过扩增、与表达载体pGS-21a连接转化等技术，将其转化到大肠杆菌BL21的过程，使这种工程菌能更好的处理农药所造成的严重危害。

关键词 opd；降解；克隆；转化

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 农药的概况-1

1.1.1农药及有机磷农药简介-1

1.1.2 农药的污染及危害-1

1.2 农药的降解方法-2

1.2.1 物理降解-2

1.2.2 化学降解-3

1.2.3 生物降解-3

1.3 有机磷农药的发展趋势-4

1.4 工程菌存在的问题和展望-5

1.4.1构建工程菌存在问题-5

1.4.2对工程菌的展望-5

1.5 本论文研究目的及意义-5

2 实验试剂、仪器、材料及方法-7

2.1 实验试剂与仪器-7

2.2 实验材料-8

2.2.1 实验菌株和质粒-8

2.2.2培养基配方-8

2.2.3 主要化学试剂的配制-8

2.3 实验方法-9

2.3.1 黄杆菌的活化及保存-9

2.3.2 opd基因的扩增-9

2.3.3 克隆载体的构建-10

2.3.4 表达载体的构建-12

2.3.5 重组表达子的筛选-13

2.4 酶活测定-13

3 结果与分析-15

3.1 opd基因的扩增-15

3.2 opd基因与克隆载体连接-16

3.3 opd基因与表达载体连接-17

3.3.1 表达载体pGS-21a-17

3.3.2 opd基因与pGS-21a连接后的电泳验证-18

3.4 酶活的测定-18

结论-20

致谢-21

参考文献-22