摘要：本论文对一株产碱性蛋白酶的芽孢杆菌进行了分子鉴定、发酵分析和酶活分析。利用PCR技术对该菌株16S rDNA序列进行扩增，获得了1435 bp的序列，将其与NCBI Genbank相关数据进行比对，使用DNAMAN软件分析相关序列，确定该菌株是一株芽孢杆菌。对该芽孢杆菌进行发酵培养，优化酶反应条件，分别在不同pH、温度，添加不同金属离子，对该菌株碱性蛋白酶酶活的影响进行分析。结果显示，该菌在连续液体发酵48 h达到产酶高峰，pH11，反应温度在40 ℃时酶活最高，达到41.23 U/mL。Cu2+对该菌株的蛋白酶活性有促进作用，Zn2+、Ca2+、Mn2+对酶活没有明显影响。

关键词：碱性蛋白酶；发酵培养；芽孢杆菌；酶学分析

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 微生物产酶的条件控制-1

1.2 蛋白酶的研究与应用-1

1.2.1 酶蛋白的分类-1

1.2.2 蛋白酶的专一性-1

1.2.3 微生物蛋白酶的酶系组成-1

1.2.4 主要蛋白酶及其性质-2

1.2.5 蛋白酶的应用-3

1.3 微生物产碱性蛋白酶的研究-4

1.3.1 碱性蛋白酶的简介-4

1.3.2 碱性蛋白酶的研究进展-5

1.4 本研究的意义-6

2材料与方法-7

2.1 实验材料-7

2.1.1菌株-7

2.1.2试剂配制-7

2.1.3主要仪器设备-8

2.2 培养基的配制-8

2.3 高压灭菌及操作台的消毒-8

2.4 菌株保藏-9

2.5 菌种的活化-9

2.6 福林试剂检测碱性蛋白酶活性-9

2.7 碱性蛋白酶发酵液中酶活的测量方法-10

3 结果与讨论-12

3.1 产酶菌株的16S rDNA序列-12

3.2 酶学性质研究-12

3.2.1 酶活定义-12

3.2.2 标准曲线的绘制-13

3.2.3 培养时间对产酶的影响-13

3.2.4 反应pH对酶活的影响-14

3.2.5 反应温度对酶活的影响-14

3.2.6 金属离子对酶活的影响-15

3.3讨论-15

结论-17

致谢-18

参考文献-19