摘要:随着人们对可食性动物药物残留大量超标的关注，检测工作也日益受到人们的重视。因此，本实验以盐酸四环素（TCH）作为研究对象，制备出了盐酸四环素人工抗原并免疫BALB/c小鼠，获得了抗体，为盐酸四环素的间接竞争ELISA检测方法奠定了基础。盐酸四环素能在溴水碱液中发生霍夫曼降解生成伯胺盐、伯胺盐在亚硝酸钠酸性溶液中发生重氮反应生成重氮盐,重氮盐分别与蛋白质载体( BSA, OVA) 偶联生成免疫原和包被原，对偶联产物采用三氯化铁法鉴定出现红棕色，初步证明人工抗原制备成功。采用紫外扫描法进行鉴定经过计算TCH-BSA和TCH-OVA的摩尔结合比分别约为2.68：1和3.24：1。对BALB/c小鼠进行细胞免疫，六周后对小鼠断尾取血测得血清效价，用间接ELISA检测出B2、B3号小鼠尾血血清的效价可达到104,则得到抗体。

关键词  盐酸四环素；人工抗原；多抗血清

目录

摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 兽药概况-1

1.2四环素类抗生素综述-1

1.3兽药免疫检测技术研究方法-3

1.3.1抗原制备-3

1.3.2免疫与抗原抗体反应-3

1.3.3农兽药多残留酶免疫分析法的基本原理-3

1.4 兽药残留检测技术-4

1.4.1 微生物检测法-4

1.4.2 理化检测法-4

1.4.3 免疫分析法-5

2 材料与方法-7

2.1 试剂与仪器-7

2.1.1 主要试剂-7

2.1.2 主要仪器-7

2.2 主要溶液-8

2.3试验方法-8

2.3.1 盐酸四环素人工抗原的合成-8

2.3.2 盐酸四环素人工抗原的鉴定-9

2.4小鼠免疫与抗体制备-10

2.4.1 小鼠免疫-10

2.4.2 抗血清的制备-10

3 结果与讨论-12

3.1盐酸四环素人工抗原的鉴定-12

3.1.1 结果-12

3.1.2 讨论-14

3.2小鼠免疫及抗体制备-14

3.2.1 结果-14

3.2.2讨论-15

结论-16

致谢-17

参考文献-18