摘要:本文采用原生质体技术，制备亚硝化细菌原生质体。通过反复富集、分离的方法获得纯种，并进行菌种鉴定。确定菌种后对亚硝化细菌进行培养，一段时间后，使用溶菌酶酶解制备亚硝化细菌原生质体，对亚硝化细菌原生质体进行培养观察并计算再生率。通过重生率的比较确定亚硝化细菌原生质体的最适制备条件。本文探讨了氨苄青霉素钠浓度及其作用时间、溶菌酶浓度、酶解时间、酶解温度对原生质体制备的影响。实验结果表明，亚硝化细菌原生质体的制备的最佳条件为：选用培养至第6d的亚硝化细菌菌液，氨苄青霉素钠作用终浓度40μg/mL，作用时间6h，溶菌酶浓度为0.5μg/mL，酶解温度40℃，酶解时间15min，在此条件下获得的亚硝化细菌的原生质体的再生率为61.54%。

关键词：亚硝化细菌；原生质体；制备

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摘要

Abstract

1 绪论-1

1.1 亚硝化细菌概述-1

1.1.1 亚硝化细菌的定义-1

1.1.2 亚硝化细菌的特点-1

1.1.3 亚硝化细菌的作用机制-1

1.1.4 亚硝化细菌的应用-2

1.2 原生质体技术-2

1.2.1原生质体的定义-2

1.2.2 原生质体的优点-2

1.2.3 原生质体获得的方法-3

1.3 影响微生物原生质体制备的因素-3

1.3.1 菌龄-3

1.3.2 酶浓度-3

1.3.3 酶解温度-4

1.3.4 酶解时间-4 

1.3.5 预处理的方式-4

1.3.6 其他影响因素-4

1.4 原生质体的研究进展与应用-4

1.5 本论文研究的目的和意义-5

2 材料与方法-6

2.1 试剂与仪器-6

2.1.1实验试剂-6

2.1.2实验仪器-6

2.2 实验方法-7

2.2.1 实验材料-7

2.2.2 培养基-7

2.2.3 亚硝化细菌液体培养-7

2.2.4 绘制生长曲线-7

2.2.5 原生质体最佳制备条件探究-7

2.2.6原生质体再生率计算-8

3 结果与讨论-9

3.1 亚硝化细菌的生长曲线-9

3.2 原生质体制备条件-9

3.2.1 氨苄青霉素钠作用浓度-9

3.2.2 氨苄青霉素钠作用时间-11

3.2.3 溶菌酶终浓度-13

3.2.4 酶解温度-15

3.2.5 酶解时间-17

3.3 最优条件下原生质体再生率-19

结论-20

致谢-21

参考文献-22